实验室凝胶成像仪研究实验室使用凝胶文件系统对凝胶电泳分离的核酸样本进行可视化和照片记录,计数微生物菌落,在蛋白质印迹上分离蛋白质样本,并通过薄层色谱(TLC)鉴定混合物。
凝胶成像仪或凝胶文档包含一个紫外线(UV)或可见(蓝色或白色)透照器,一个遮光罩来阻挡外部光源对样品的照射,以及一个用于图像捕捉的高分辨率相机。
将装载在琼脂糖凝胶、皮氏培养皿或TLC薄膜上的样品放置在透射器表面。在关闭检修门以防止操作员暴露在紫外线下后,打开灯,并通过CCD或CMOS摄像机对样品进行照片记录。图像保存到车载软件系统,以便于检索或记录导出到Microsoft Excel或LIMS。
在分子生物学、基因组学、蛋白质组学和微生物学实验室中常见的凝胶成像系统支持PCR片段鉴定、DNA定量、细菌细胞培养、环境样品测试和蛋白质分离。
核酸(DNA或RNA)样品被装载到琼脂糖或丙烯酰胺凝胶上,并暴露在电场中,使带负电的样品沿着凝胶向正极移动。较小的DNA或RNA片段比较长的片段传播得更快,这使得研究人员能够识别用荧光染料标记的片段,从而切除样本进行进一步纯化。DNA凝胶通常用于PCR分析、克隆和下一代测序。
蛋白质样品被装载到聚丙烯酰胺凝胶中浸没在商业可用的缓冲液Tris-Glycene或Tris-Acetate - Tris-Glycene或Tris-Acetate -用于分离和纯化。与DNA凝胶类似,不同长度的蛋白质片段在凝胶基质中以不同的速度移动。蛋白质凝胶用于质谱分析、样品变性和印迹。
菌落计数是确定在装有细胞培养基的皮氏培养皿的最佳生长条件下存在的微生物菌落形成单元(CFU)数量的过程。
每个菌落形成单位代表生长在培养皿上的同质、活细胞数量的大致估计。菌落计数用于检测和量化土壤、水或食物样品中的微生物,以及鉴定独特的细胞系,用于微生物细胞培养研究。
薄层色谱法(TLC)是一种研究技术,用于使用惰性背衬支撑的薄膜分离混合物的成分。当混合物通过色谱柱或固定相时,其组分将根据其与色谱柱或溶剂(流动相)的亲和力以不同的速度迁移。常见的固定相包括硅胶、纤维素和氧化铝。常用的流动相包括甲醇、乙酸和乙酸乙酯。TLC用于量化和鉴定许多物质,包括脂质、碳水化合物、脂肪酸和农药。
免疫印迹凝胶,用于分离蛋白质以进一步分离和纯化,主要有两种形式:天然凝胶和SDS-PAGE凝胶。天然凝胶,用于研究酶或蛋白质复合物,根据大小和离子电荷分离蛋白质。SDS-PAGE凝胶用于研究抗体亲和力,通过使用洗涤剂十二烷基硫酸钠(SDS)变性样品,根据大小分离蛋白质。
南部吸水凝胶,用于通过限制性内切酶消化从血液或组织样本中分离DNA片段,主要有两种形式:含尿素的聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶和含尿素的十二烷基硫酸钠(SDS)凝胶。
带照相机的凝胶成像仪包括分辨率从500万像素到1790万像素的CCD或CMOS摄像机。百万像素数字表示图像中单个点的数量。具有更高像素数的相机生成的图像具有更高的分辨率、更高的灵敏度和更好的图像清晰度。
尽管大多数商用凝胶成像系统提供可选的外部打印机。
分析耶拿的UVP PhotoDoc-It系统包括一个集成打印机,方便打印高质量的凝胶图像。
德国耶拿分析仪器公司的凝胶工作室,盖尔索洛和多文档It成像装置包括侧面检修门,便于装载和卸载凝胶或培养板。
德国耶拿分析仪器公司的ChemStudio,凝胶工作室和盖尔索洛成像仪包括用于过滤和照明控制的集成彩色触摸屏。车载软件系统中的模板和宏可编程,以支持自定义工作流。
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生命科学实验室使用实验室透射器,或凝胶灯箱,来可视化通过显微镜分离的DNA、RNA或蛋白质样本凝胶电泳.
实验室透射器含有紫外线(紫外线)或可见的(蓝色或白色)光源、玻璃观察面、防紫外线或琥珀色过滤器盖。
透射器在玻璃观察面(放置琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶的地方)上以指定波长发射紫外线或可见光。透射器可用作独立系统或与凝胶记录成像仪结合使用。
在分子生物学、基因组学、微生物学和药物开发实验室中常见的透照仪支持PCR片段鉴定、DNA定量和限制性内切酶消化后的样品纯化。
凝胶透射器发射紫外线(254 nm, 302 nm和365 nm)或可见光(465海里)用于荧光核酸或蛋白质样品的可视化。透射器发出的紫外线或可见光波长必须与凝胶分离期间使用的荧光染料的吸收光谱相匹配。
蓝色的光,在465纳米,最适合于查看用商用染料(如SYBR绿、SYBR金或GFP)染色的样品。
254纳米光最适合用于DNA交联,302纳米光最适合用于溴化乙锭染色的短曝光凝胶,365纳米光最适合用于凝胶条带切割。
的Accuris智能蓝色紧凑型是一种占地面积小的透射器,具有4“正方形的观察表面,以节省工作台空间。更大的占地面积透射器,如UVP的FirstLight,包括一个14”x 11“的观察表面,可在一次运行期间观察多个凝胶。
紫外线透射器包括一个254纳米、302纳米或365纳米用于DNA、RNA或蛋白质样品定量荧光成像的nm光激发源。背光、25瓦紫外灯发射高输出照明,以确保成像表面的均匀性和凝胶对凝胶的精确比较。
虽然紫外线照射能比蓝光更精确地成像凝胶带,但紫外线照射会导致样品损坏(由于过度曝光)和工人受伤的风险更高。所有使用紫外线透照器的操作人员必须佩戴紫外线面罩,并在设备运行时使用紫外线屏蔽表面罩。
用于核酸和蛋白质凝胶可视化的光透射器
可见光透照器包括一个8瓦的灯泡发出465纳米的蓝光,用于显示含有SYBR Green, SYBR Safe或GFP荧光染料的核酸或蛋白质凝胶。
虽然可见光模型显示均匀性和频带清晰度降低与UV系统相比,它们没有样品损坏或操作人员暴露的风险。尽管可见光透照器是紫外线系统的经济替代品,但它们在显示溴化乙酯凝胶和进行精确凝胶对比方面效果较差。
单光透照器对于涉及单荧光染料凝胶染色的低通量研究设置是理想的。
可变光强透照器包括低,中,高设置不同的应用。低强度模式最适合凝胶定位、多波段切除和样品成像。中等强度模式是理想的单带切除。高强度模式最适用于低样品浓度。
的Accuris SmartDoc 2.0该系统与智能手机和平板电脑兼容,支持荧光凝胶染色成像。每个型号都包括一个橙色成像过滤器,以提高样品的清晰度。
耶拿UVP台式透射器分析包括可选的双或三重UV灯的光发射多达三个独立的,同时波长:254 nm, 302 nm,和365 nm。
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